人類白細胞抗原ELISA試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)技術(shù)的體外檢測試劑盒,主要用于定量或定性檢測人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等生物樣本中特定HLA分子(如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E等)的濃度。HLA是人類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的編碼產(chǎn)物,位于第6號染色體短臂,廣泛參與免疫識別、抗原呈遞及移植排斥反應(yīng),在器官y植配型、自身免疫疾病研究和腫瘤免疫等領(lǐng)域具有重要意義。
該試劑盒通常采用雙抗體夾心法原理:微孔板預(yù)先包被特異性抗HLA抗體作為捕獲抗體;加入待測樣本后,HLA抗原與固相抗體結(jié)合;再加入生物素標記的檢測抗體,形成“抗體-抗原-檢測抗體”復(fù)合物;隨后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的親和素,通過酶催化底物顯色,顏色深淺與樣本中HLA含量成正比,最終通過酶標儀測定吸光度并計算濃度。
一、整體保存原則(必記)
核心溫度:2~8℃冷藏(冰箱冷藏室),嚴禁冷凍(-20℃),否則酶、抗體變性失活,包被板脫落。
全程避光、干燥、密封,遠離熱源與陽光直射。
豎直放置,防止液體滲漏、交叉污染。
有效期:未開封6–12個月(見盒簽);開封后1–3個月內(nèi)用完。
二、未開封試劑盒(整套)
存放:2~8℃、避光、干燥、密封原包裝。
環(huán)境:濕度<60%,遠離冰箱門/制冷風(fēng)口(減少溫度波動)。
禁止:不可冷凍、不可室溫久放、不可暴曬。
三、開封后各組分保存(關(guān)鍵)
1.酶標板(96孔板)
未用完板條:連同干燥劑→鋁箔袋密封→2~8℃保存。
有效期:開封后≤1個月,受潮易長菌、影響結(jié)合效率。
禁止:冷凍、敞口、潮濕環(huán)境。
2.標準品(凍干/液體)
凍干標準品:2~8℃密封保存;復(fù)溶后分裝成小份→-20℃冷凍,避免反復(fù)凍融。
液體標準品:2~8℃,開封后1周內(nèi)用完。
3.酶結(jié)合物(HRP標記抗體)
保存:2~8℃避光(棕色瓶或鋁箔包裹)。
長期不用:分裝后-20℃冷凍,反復(fù)凍融≤2次。
風(fēng)險:光/熱易致酶活性下降、背景升高。
4.顯色底物(TMB)
保存:2~8℃嚴格避光(棕色瓶、鋁箔包裹、避光盒)。
有效期:開封后1周內(nèi)用完,變藍即失效。
禁止:冷凍、光照、接觸金屬。
5.濃縮洗滌液(20×)
保存:2~8℃或室溫(15–25℃),密封防污染。
低溫結(jié)晶:37℃水浴溶解,不影響效果。
稀釋后:2~8℃保存,3天內(nèi)用完。
6.終止液(稀硫酸)
保存:2~8℃密封,防揮發(fā)、防腐蝕。
安全:單獨存放,避免與酶/抗體接觸。
四、絕對禁忌(易踩坑)
嚴禁冷凍試劑盒整體及酶標板(蛋白變性、包被脫落)。
避免反復(fù)凍融標準品/酶結(jié)合物(活性斷崖式下降)。
TMB底物絕對避光(光氧化→顯色異常、假陽性)。
開封后不密封/不加干燥劑(受潮長菌、板條失效)。
溫度波動大(冰箱門頻繁開關(guān)、靠近風(fēng)口)。
五、快速記憶口訣
2–8℃冷藏不凍,避光干燥密封好;
板條干燥劑封袋,標準品分裝防融;
TMB避光別冷凍,洗滌液結(jié)晶37溶。
